产品货号：
KL00222
中文名称：
通用型LAMP试剂盒(荧光染料法)
英文名称：
Universal LAMP kit
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒含有荧光染料法LAMP扩增所需的所有成分，可以用于荧光染料实时LAMP等温扩增。
LAMP即环介导等温扩增，它利用4条模板专一的特异引物和具有链置换能力的Bst DNA聚合酶，在等温条件下(65℃左右) 30～60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于定性PCR技术，同时还不需要昂贵的仪器设备。目前已成功应用于生物的快速检测，广泛用于各个领域。
保存：-20℃，有效期1年。
LAMP模板、LAMP引物。
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LAMP即环介导等温扩增，它利用4条模板专一的特异引物和具有链置换能力的Bst DNA聚合酶，在等温条件下(65℃左右) 30～60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于定性PCR技术，同时还不需要昂贵的仪器设备。目前已成功应用于生物的快速检测，广泛用于各个领域。
- 即开即用，含有本公司开发的LAMP专用荧光荧光染料，比常规的SYBR更好，不会产生抑制。
- 在荧光定量PCR一起上进行扩增时，可以实时跟踪扩增过程，但不宜用于定量（这是LAMP技术决定的）。
- 高特异性，精心优化的配方，非特异扩增比自配的试剂更低。
- 高灵敏度，一般比PCR灵敏一个数量级（取决于引物的筛选）。
- 4×MasterMix，最多可加入14μL模板，降低漏检率。
- 本试剂盒足够50次20μL体系的LAMP扩增。
- 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。
- 本制品只能用于科研，不能用于临床。
| 组分 | 规格 |
| 4×LAMP MasterMix(含荧光染料) | 200μL |
| Bst DNA聚合酶2.0 | 50μL |
| LAMP阳性对照模板-引物混合物 | 50μL |
保存：-20℃，有效期1年。
LAMP模板、LAMP引物。
- 制备模板DNA：用于选用合适的方法制备模板DNA。如果有N个样品，最好设置N+2个样品制备，多出的两个一个是样品制备阳性对照，一个是样品制备阴性对照。
- 配制自备的20×LAMP引物混合液。
先加超纯水将合成的HPLC级别的下列引物干粉稀释到下表所标注的母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水，最后得到0.1mL的20×LAMP引物混合液，此混合液足够100次20μL体系的LAMP扩增。如果需要配制的20×LAMP引物混合液体积异于0.1mL，则各成分的用量请按比例调整。引物混合液可以在-20℃放置2年。
注：如果没有Loop引物，则用水替代。引物名称 母液浓度 加母液量 在20×LAMP引物混合液中的浓度 FIP引物 100μM 32μL 32μM BIP引物 100μM 32μL 32μM F3引物 100μM 4μL 4μM B3引物 100μM 4μL 4μM Loop F 100μM 8μL 8μM Loop B 100μM 8μL 8μM 超纯水 12μL 终体积 0.1mL - 在冰上融化4×LAMP MasterMix(含荧光染料)，混匀，稍离心。第一次使用时，请将50μL Bst DNA聚合酶2.0全部加入到4×LAMP MasterMix中轻柔混匀，然后再使用。如果有N个样品，则在N+2个反应管中加入以下组份，多出的一管是LAMP扩增阳性对照（PC），一管是LAMP扩增阴性对照（NC）：
成分 N+2个样品管 LAMP扩增PC LAMP扩增NC 4×LAMP MasterMix(已加酶) 5μL 5μL 5μL 自备20×LAMP引物混合液 1μL 不加 1μL LAMP阳性对照模板-引物混合物 不加 5μL 不加 自备模板DNA 1～14μL 不加 不加 自备超纯水 至20μL 至20μL 至20μL - 混匀，置于荧光定量PCR仪器中65℃保温60分钟，每分钟采集一次SYBR通道的荧光信号。如果荧光定量PCR仪不能设置恒温扩增参数，可以把变性复性和扩增三个温度都设置为65℃，三个步骤的总时间为1分钟即可，共60个循环，在任何一步采集荧光信号即可。
- 结果分析：实验有效性判定。如果两个阳性对照能够得到标准的S型扩增曲线而两个阴性对照都没有扩增，则实验有效，才有必要对样品进行分析。如
果阳性对照没有出现S型扩增曲线，则说明试剂盒可能失效，实验无效。如果阴性对照有S型扩增曲线，则说明LAMP引物设计得不好，有非特异扩增，需要重新优化引物。也可能是环境或试剂有污染，实验无效。遇到实验无效的情况，请跟厂家客户联系，分析原因后再恢复实验。 - 如果实验有效，则分析样品。凡是有S扩增曲线的，可以判断为阳性。凡是没有S扩增曲线的，可以判断为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性结果，扩增曲线为S型，右边为阴性结果，扩增曲线不呈S型。
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